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常用蛋白表白系统——优弊端、利用领域

蛋白表白是指用模式生物如细菌、酵母、动物

2015-07-30
|
接见量:

蛋白表白是指用模式生物如细菌、酵母、动物细胞或者植物细胞表白表源基因蛋白的一种分子生物学技术。

表白系统利益弊端利用领域
大肠杆菌表白系统
Escherichia coli
表白水平高 ;
低成本 ;
单一的造就前提 ;
出产迅速 ;
可拓展性强 ;
转化操作单一 ;
蛋白表白能够通过多个参数进行优化 ;
容易形成二硫键
蛋白折叠性较差(蕴含细菌蛋白) ;
易形成宽恕体 ;
低效的体表折叠可能抵消优势 ;
与真核生物分歧密码子系统 ;
很少的翻译后建饰 ;
内毒素
纯化蛋白的出产(结构、酶、药物发现) ;
药物蛋白出产
毕赤酵母表白系统
Pichia pastoris
表白水平高 ;
低成本 ;
单一的造就前提 ;
出产迅速 ;
可拓展性强 ;
排泄蛋白或细胞内表白的优良选择 ;
蛋白排泄高效且允许单一纯化 ;
宽泛的翻译后建饰 ;
N-端糖基化能力优于酿酒酵母 ;
无内毒素
使用甲醇作为诱导剂拥有肯定风险 ;
糖基化依然分歧于哺乳动物细胞
纯化蛋白的出产(结构、酶、药物发现)
酿酒酵母表白系统
Saccharaomyces cerevisiae
表白水平较高 ;
排泄蛋白或细胞表白的优良选择 ;
低成本 ;
单一的造就前提 ;
可拓展性强 ;
占有大无数真核生物的翻译后建饰 ;
有效的蛋白折叠 ;
无内毒素 ;
比毕赤酵母的表白水平低 ;
排泄能力可能低于毕赤酵母 ;
糖基化与哺乳动物细胞分歧 ;
过糖基化 ;
N-端糖基链结构拥有致敏性
纯化蛋白的出产(结构、酶、药物发现) ;
药物蛋白出产
哺乳动物细胞表白系统较高的表白水平 ;
中度的可扩大性 ;
细胞的悬浮造就个性可大规模出产 ;
有效的蛋白折叠 ;
适合排泄蛋白 ;
充分的翻译后建饰 ;
无内毒素
造就基昂贵 ;
复杂的成长前提
纯化蛋白的出产(结构、酶、药物发现) ;
药物蛋白出产 ;
基于细胞的钻研
杆状病毒浸染后的虫豸细胞
( 杆状病毒-虫豸细胞表白系统)
表白水平高(出格是细胞内蛋白) ;
较快的成长速度 ;
有效的细胞折叠 ;
中度可扩大性 ;
宽泛的翻译后建饰 ;
糖基化与哺乳动物细胞类似 ;
相对容易地酶促的去糖基化(对于蛋白结构测定有利) ;
无内毒素
造就基昂贵 ;
必要大量的病毒 ;
亲肽的排泄通路低效 ;
糖基化依然分歧于哺乳动物细胞 ;
病毒侵染会导致细胞裂解和潜在的表白蛋白降解
纯化蛋白的出产(结构、酶、药物发现)
瞬时表白系统蛋白的急剧出产通路转染试剂昂贵 ;
必要大量质粒DNA
不变细胞系可获得蛋白出产细胞株系出产速度缓慢(必要数月) ,出格是使用选择性克隆的情况下传代过程中表白能力可能降落
无细胞蛋白出产蛋白的急剧出产通路 ;
大肠杆菌 ,幼麦胚芽 ,虫豸和哺乳动物系统均市售 ;
出产量的可控 ;
蛋白合成前提可控 ;
可容易地吸收非氨基酸组分 ;
可利用PCR产品作为模版 ,适合于单一的高通量步骤 ;
在没有犬科胰岛素的情况下有限的翻译后建饰
量化出产成本昂贵纯化蛋白的出产(结构、酶、药物发现) ;
体表表白克 ;
同位素象征过的核磁共振蛋白 ;
吸收非天然氨基酸组分
BacMam-介导的瞬时转导蛋白的急剧出产通路 ;
可扩大性强 ;
无需纯化所需的大量质粒DNA ;
非裂解(拜见杆状病毒/虫豸细胞)
很多人体细胞的高效转导 ;
病毒需要量大


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